尊龙凯时开发的实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型是多发性硬化（MS）研究的金标准动物模型。EAE通过模拟自身免疫性T细胞对中枢神经系统的攻击，重现了MS的核心病理特征，包括神经炎症、脱髓鞘和神经功能障碍等。因此，EAE模型在MS发病机制的研究、神经免疫调节药物的筛选（如Roflumilast）以及髓鞘修复和神经保护疗法的开发中得到了广泛应用。

尊龙凯时依靠其专业研发实力和严格的质量控制体系，精心制作了一整套高稳定性和高重复性的EAE模型研究试剂组合，其核心试剂的优势包括：✅现货速发：国内现货的百日咳毒素，纯度高达99%，品质卓越，性价比高；✅高发病率：C57BL/6小鼠在免疫后10-14天稳定发病（临床评分2-4分）；✅出色的病理重现性：明确的髓鞘脱失（通过LFB染色）和Th17细胞浸润（流式细胞术验证）；✅多维评价体系：支持临床评分、行为学、组织病理学和分子生物学全方位验证。

EAE模型核心试剂

（1）免疫原（抗原）：MOG₃₅₋₅₅（髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55肽段），来源于人工合成肽，模拟MS中的自身抗原，通常使用150-300μg/只小鼠（溶解于PBS、生理盐水或CFA中）。

（2）佐剂：完全弗氏佐剂（CFA），成分为矿物油与灭活结核分枝杆菌（如Mycobacterium tuberculosis H37Ra，浓度4-5mg/mL），其作用是加强免疫应答，并与MOG₃₅₋₅₅乳化后使用。

（3）免疫增强剂：百日咳毒素（Pertussis Toxin, PTX），剂量为200-500ng/只小鼠（腹腔注射），注射时间为免疫当天（第0天）及第2天（第2天），其作用是破坏血脑屏障以促进T细胞浸润中枢神经系统。

EAE模型诱导方法

（1）实验准备：通常选择6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠或Sprague-Dawley大鼠，每组至少需要10只动物以确保统计学意义。在实验环境中适应1周，并保持温度、湿度和光照条件稳定。试剂准备方面，将MOG35-55肽溶解于生理盐水中，与等体积的CFA混合乳化，形成均匀乳剂。

（2）EAE诱导：在第0天，将300µg MOG35-55肽与300µL CFA混合乳化后，分两次（每侧100µL）皮下注射于小鼠双侧腋窝和腹股沟。随后，进行200ng PTX的腹腔注射。第2天，再次进行200ng PTX的腹腔注射。

EAE模型验证

EAE模型的验证需要通过临床评估、行为学、组织病理学和分子生物学等多维度进行。以下是具体的验证方法：

（1）临床评分验证：标准化评分系统采用0-5分量表，根据观察时间从第0天开始，持续30天或更长时间。体重监测亦是EAE模型的重要指标，每天记录小鼠体重变化以评估模型成功。

（2）行为学检测：包括转棒实验（Rotarod）和步态分析（CatWalk或足印法）来评估运动功能。抑郁样行为检测通过强迫游泳实验（FST）和悬尾实验（TST）实现。

（3）组织病理学验证：通过灌注固定脊髓和脑组织，并进行切片制备与染色，评估病理特征，包括炎性细胞浸润和髓鞘脱失。

（4）分子生物学验证包括流式细胞术分析T细胞亚群及细胞因子的检测，这些都是确认EAE模型的重要手段。

模型成功标准

基础标准是发病率达到80%（临床评分≥2），且病理确认显示炎性浸润与髓鞘脱失。高级标准则要求出现行为学异常，也需筛选分子标志物。

常见问题与解决方案

如发现无临床症状，需检查CFA/PTX是否失效，调整试剂或提高PTX剂量。若死亡率高，则应降低PTX剂量并确保无菌操作。若病理结果为阴性，则应在发病峰值时取材。

特色应用案例

尊龙凯时与东南大学医学院的神经精神病学研究所联合进行了EAE大鼠模型的研究，以探讨Roflumilast的效果。研究表明，Roflumilast可能对缓解MS引起的抑郁症状和急性运动障碍具有潜力，其抗炎特性提示其在MS治疗中的应用前景。

以上概述展示了尊龙凯时在生物医疗领域的研发成果及其在多发性硬化症研究中的应用，帮助广大科研人员深入了解EAE模型的构建与验证，并推动相关研究的进展。