琼脂糖凝胶电泳概述

琼脂糖凝胶电泳是一种采用琼脂或琼脂糖作为支持介质的电泳方法，适用于大分子样品如核酸、病毒等。为了改善分离效果，通常选用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳。

常见问题及解决方案

进行琼脂糖凝胶电泳时，可能会遇到以下问题：

• DNA带模糊或降解：应避免核酸酶污染，电泳缓冲液应定期更换以确保其活性。
• 不当电泳条件：电压不应超过20V/cm，温度应保持在<30℃，对于大分子DNA，温度应控制在<15℃。
• 上样量过多或过少：应合理调整DNA上样量，避免影响电泳效果。
• 盐分过高：通过乙醇沉淀去除多余盐分。
• 蛋白污染：进行酚抽提以净化样本。
• 不规则迁移：对特定片段进行预处理，如在65℃加热DNA后迅速冷却。

实验注意事项

在进行琼脂糖凝胶电泳实验时，应关注以下几点以确保实验的成功：

1. 确保关键试剂如引物、酶和超纯水的有效性，避免污染。可以将试剂标记并妥善存放，防止被他人干扰。
2. 采用经过验证的PCR体系以提高实验成功率。
3. 为获得优质电泳图，可在PCR开始时准备胶体，确保凝胶孔径的均匀性。如需隔天再进行电泳，务必将样本保存于4℃。
4. 推荐使用高质量的排枪进行上样，以提高样本加入胶孔的效率。
5. 不论电泳室使用频率如何，建议每次电泳时更换电泳液，以避免条带失真。

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